需要试剂：

氯仿、异丙醇、75%乙醇(用DEPC水配制)、RNase free 水、组织匀浆。

操作步骤：

1、样本处理

(1)取出高温高压消毒后研钵，切取 50-100mg冰冻组织置于研钵内，倒入液氮，研碎;

(2)每50-100mg均浆组织标本中加入1ml的高效TRIZOL裂解液，标本的量不能超过

高效TRIZOL裂解液 体积的 10%，否则会出现 DNA 污染;

(3)将以上匀浆标本转移到1.5ml的EP管中，在15-30℃放置5min，以彻底分离核蛋白复合体;

2、相分离

加入0.2 ml的氯仿，加盖好后用手剧烈摇晃15s，在15-30°C放置2-3min，然后离心

12,000xg，15min;离心后分成三层，取上层水相。RNA只存在于水相中，水相占总体积 的 60%。

3、RNA 沉淀

将上层水相转移到另一干净的 EP管中，加入0.5ml异丙醇，15-30℃，静置10min，然后

12,000xg，4°C离心10min。离心前可以在管的侧壁和底部看到絮状胶样沉淀，这就是 RNA 沉淀。

4、RNA 洗涤

去上清，加入1ml 75%乙醇洗涤RNA沉淀，振荡器混匀，7,500xg，4℃离心5min.

5、RNA 再溶解

去上清，置真空或空气中 5-10min，干燥 RNA沉淀。注意不能将 RNA沉淀完全干燥，这样会极

大地降低它的溶解度。部份溶解的RNA样品其 A260/280 比值<1。用无 RNase 水或 0.5% SDS

溶液重悬 RNA沉淀，用枪头反复吹打几次，55-60°C，静置10min。测浓度后-20℃保存。

6、测浓度

取2μl储存液加入另一个EP管中,再加入98μl无RNase水,离心混匀,以无RNase水作空白对

照,测OD260/280值。0D260/280 值在1.8-2.0视为纯度很高。

●一般浓度在1000ng/μI较准。浓度太高要稀释以后再测定。

●RNA鉴定:琼脂糖电泳,确定抽提RNA完整性和DNA污染情况。

【注意事项】

在使用高效TRIZOL裂解液的时候要带手套和眼罩，避免接触到皮肤和衣服，使用化学通风橱，防止蒸汽吸入。

除非特别说明，所有的操作均在 15-30°C下进行，所用的试剂均放置于15-30°C。

组织在加入氯仿之前是可以在-60至-70°C放置一个月。RNA沉淀在75%乙醇中在2至8℃下至少可以放置一周，

在-5至-20℃至少可以放置一年。