【产品介绍】
本试剂盒采用独特的裂解液及终止液(含PCR增强剂),所得产物不受细胞释放PCR抑制剂影响可
以直接用于扩增产物不超过500p的PCR扩增。可用于小鼠转基因定性分析及突变定性分析。
【适用范围】
初生一周龄仔鼠尾或耳朵
【产品组分】
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Component
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HC0862
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MT DNAex LB1裂解液
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4x1ml
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MT DNAex DB2 终止液
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4x1ml
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2×Super PCR Mix
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1ml
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【适用范围】
初生一周龄仔鼠尾或耳朵
【操作步骤】
1.取0.2-0.3cm长的初生一周龄仔鼠尾,放到1.5ml的EP管,用研磨棒或枪头送入离心管底部,加入
40μI MT DNAex LB1,用研磨棒或枪头进行研磨(1min左右即可,研磨标准是液体明显浑浊,无需
整个组织全部破碎);
2.沿着研磨棒或枪头壁加入40u MTDNAex DB2,并用研磨棒或枪头将其混匀;
3.吸取5ul产物,放入新的1.5ml离心管中,并加入25ul ddH2O,混匀,产物可以直接用于PCR扩增。
注:研磨棒用5%次氯酸钠浸泡30min可以完全去除DNA污染;枪头可使用蓝枪头。
如果需要更好的效果可参考以下方案:
1.取0.2-0.3cm长的初生一周龄仔鼠尾,放到1.5ml的EP管,用研磨棒或枪头送入离心管底部,加入
40μl MT DNAexLB1,用研磨棒或枪头进行研磨后,金属浴95°C处理10min;
2.沿着研磨棒或枪头壁加入40uI MTDNAex DB2,并用研磨棒或枪头将其混匀,12000rpm,离心
5min后取上清备用;
3.吸取5ul上清,放入新的1.5ml离心管中,并加入25ul ddH20,混匀,产物可以直接用于PCR扩增。
推荐PCR反应体系:
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Component
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Volume (μl)
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产物
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2
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2×SuperPCR Mix
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10
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前引物(10μM)
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0.5
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后引物(10μM)
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0.5
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ddH2O
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7
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扩散条件:
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90℃,10s
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35 cycles
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56℃,15s
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72℃,15s
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4℃,∞
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3.产物经稀释后可立即用于PCR或qPCR反应,或在-20°C保存,并在半年内使用;
长期存放建议分装后在-70°C保存。cDNA应避免反复冻融。
【注意事项】
1.本产品试验结果仅用于定性分析,不建议用于定量分析试验;
2.本产品减少DNA提取步骤,可以有效预防DNA污染的发生,但不能完全避免DNA的污染,如果需
要更可靠的结果,请于生物安全柜中完成DNA提取及PCR预混过程;
3.MT DNAex LB1和MT DNAex DB2如果长期不用可以保存到-20°℃;
4.MT DNAex LB1如果出现沉淀, 可以40°C孵育5min溶解,不影响效率。
5.为保证良好的检测效率,请将目的片段设计在500bp以内且质量好的引物。
【声明】
仅用于科研使用,不能用于临床诊断和治疗。