多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，例如Triton、SDS、NP-40等，RIPA裂解液(强)(Enhanced
RIPA Lysis Buffer)是采用一种经典的细胞组织快速裂解，并获得总蛋白的裂解液，其裂解强度大于NP-40
裂解液、RIPA裂解液(中)，所获得的蛋白质可以用于Western,免疫沉淀(Immunol Precipitation, IP)等。
Leagene Enhanced RIPA Lysis Buffer E要由 Tris 、 NP-40, sodium deoxycholate
等组成，并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。该试
剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
操作步骤(仅供参考)
配制含有 PMSF Enhanced RIPA Lysis Buffer: 取 Enhanced RIPA Lysis Buffer 置于室温平衡，加
入PMSF，使其终浓度为1mM，临用前配制，不可长期保存。
(一)贴壁细胞
1、去除贴壁细胞的培养液，用PBS、NS或无血清培养液清洗1次，低速离心，弃上清，留取沉淀。
2、6孔板每孔加入150~250μl 含有 PMSF 的Enhanced RIPALysis Buffer，用手指轻弹细胞，使其松散，
移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触，置于冰上或4°C裂解，通常裂解液作用于细胞1~3s内细胞就
会被裂解，通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的
用量到200~250μl。
3、10000~12000g4°C离心5~10min(如无低温离心机，室温离心亦可),取上清。
4、后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)悬浮细胞
1、低速离心悬浮细胞，弃上清，用PBS、NS或无血清培养液清洗1次，离心留取沉淀。
2、下同贴壁细胞2~4操作步骤。
(三)组织样本
1、组织剪碎，越小越好。
2、放置液氮或超低温冰箱中冷冻30min，用液氮研磨，尽量控制在1~2min之内以减少蛋白的降解，每
20mg组织加入150~250ul含有 PMSF的Enhanced RIPALysisBuffer，冰上或4°C裂解 15~30min。
3、亦可按照每20mg 组织加入150~250μl含有 PMSF 的Enhanced RIPA Lysis Buffer用玻璃匀浆器或组
织研磨器匀浆，直至充分裂解，该过程尽量控制在2~5min之内以减少蛋白的降解。
4、下同贴壁细胞2~4操作步骤。
注意事项:
1、去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。
2、如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用
量。
3、如果细胞量较多，必需分装成50~100万细胞/离心管，然后再裂解，大团的细胞较难裂解充分，而少
量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
4、如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈Vortex使样品裂解充分，
然后同样离心取上清用于后续实验，直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆
器裂解的充分。
5、Enhanced RIPA Lysis Buffer 含有Leagene特殊成分，在低温情况下有可能出现浑浊
现象，可37°C水浴促其溶解，不影响使用效果;溶解时间不易过长，避免成分失效，4度保存即可，长期不
用亦可-20°C保存。
6、PMSF溶液可置4°C保存1~2周，-20°C可保存1年以上，室温放置2天即可能失效。
7、裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象，该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物，
在不检测和基因组 DNA结合特别紧密的蛋白的情况下可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和
基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。
8、细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或4°C进行。
9、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
有效期:12个月有效;低温运输，按要求保存。
