【产品组分】

【产品说明】

BCA蛋白定量分析试剂盒是一种基于二喹啉甲酸(BCA),利用比色法测定总蛋白浓度的蛋白定量试

剂盒,具有高灵敏度和高稳定性的特点。原理为在碱性介质中,蛋白质可将Cu2+还原成Cu+。

BCA试剂和亚铜离子整合形成紫色显色物质,在562nm处具有很强的吸光值。在很宽的蛋白质浓

度范围(20-2000ug/ml)内,吸光值和蛋白质浓度具有良好的线性关系。BCA蛋白定量分析试剂盒

可与去污剂兼容。

【使用说明】

1.每次测定样品浓度时,均应绘制标准曲线,使测量结果准确。

2.用同一种稀释液稀释蛋白标准品和待测样品(建议0.9%NaCl或PBS)，以保证结果的准确性。

3.在条件允许时,每个BSA标准品和待测样品均建议测定两个平行反应(副孔)，以提高测量的准确性。

                 4.使用前请参照附表一,确定待测样品中无超出耐受浓度的干扰物,如EDTA最大耐受浓度为10mM。

【操作步骤】

1.BCA工作液配制

根据所测样品和标准品的数量,将50份BCA试剂A与1份BCA试剂B充分混匀(50:1)，制备工作液。

注:a.当试剂B加入到试剂A中时,可能有浑浊产生,经搅拌后迅速消失,得到苹果绿色工作液。

b.工作液储存于密闭容器中,在室温下可稳定保存24小时。

2.蛋白浓度测定

a.将BSA标准品和待测样品各25ul加入到96孔板中,待测样品浓度检测范围为20-2000ug/ml。

注:加入提取蛋白5-25ul,不足25ul加入稀释液(0.9%NaCl或PBS)补足25ul。

b.每孔加入200uI BCA工作液,充分混匀。

c.37度孵育30分钟。冷却至室温后,用酶标仪测定562nm或该波长附近(540nm-590nm)的吸光值。

d.绘制标准曲线,计算待测样品的蛋白浓度。

注:如有个别标准品吸光值偏离较大,应在绘制标准曲线时去除。如待测样品浓度超出测量上限 (2000ug/ml),应稀释后再次测定。

附表一  干扰物质耐受浓度