飞克级ECL发光底物试剂盒用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶（HRP）的抗体及其关联的抗原。其原理是，蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上，以一抗及 HRP 标记的二抗结合膜上的目的蛋白，或以 HRP 标记的探针直接或间接结合膜上的核酸。洗膜后用本产品配制的 ECL 工作液，室温孵育膜数分钟，将印迹膜用保鲜膜包被粘贴固定于 X 光片曝光暗盒。然后转入暗室将 X 光胶片压在膜上曝光数秒到数小时，显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在 X 光胶片上。本产品采用独特的发光底物系统，降低曝光背景的同时引入新型的氧化剂，大大提高试剂盒的稳定性，使其在室温能稳定放置一年。本产品配制的 ECL 工作液衰减较慢，15min 内荧光几无减弱，检测时产生的非特异背景非常低，也可节省抗体和待测样品的用量，该试剂可用于 PVDF 膜和 NC 膜(硝酸纤维素膜)的 Western blot疫印迹等印迹发光显色。除用于 X 光胶片，还可直接使用荧光 CCD 扫描。

【适用范围】

用于 HRP 标记抗体的 Western Blot 和 HRP 标记探针的核酸杂交。

【注意事项】

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 步骤 1～5 可在日光灯下操作；但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的干净。

3. 长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。

4. 发光工作液孵育约 3 分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使 X 光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使 X 光胶片感光，因此弱带可曝光 1-10 小时。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用 ECL 发光和曝光。

5. 发光工作液的荧光持续时间很长，但在开始反应后的 20min 内荧光更强一些，随后荧光逐渐减弱，因此请注意充分利用这荧光较强的 20min 进行曝光或成像仪检测。

6. 由于发光液灵敏度高，抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败，所以要适度优化抗体浓度。若检测检测灵敏度仍不足以满足实验需要时，请选择灵敏度更高的飞克级ECL发光底物试剂盒。

7. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。

8. 避免将多张膜置于同一个洗膜盒内洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。

9. 使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。

10. 使用生物素-亲和素系统，避免使用牛奶封闭，可能会导致背景过高。

11. 金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点，避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子，建议使用塑料的平头镊子。

12. 各溶液使用后，请盖紧瓶盖以防止失效，特别是 B 液含有氧化剂，比较容易被还原而失效。

13. 叠氮化钠（NaN3）能抑制 HRP 活性，洗涤液、封闭液和抗体稀释液中应避免使用 NaN3，如必需使用勿超过 0.01%。

14. 本产品 A 液和 B 液均对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护避免直接接触人体或吸入体内。本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

【保存条件】

4℃密封避光保存一年以上，短期可放置室温。如果长期不用，-20℃避光保存可以保存更长时间。